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有关液相色谱仪的系统组成介绍

类别:解决方案      出处:维库仪器仪表网      发布于:2019-09-26 16:31:51 | 38 次阅读

    液相色谱仪系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。


    储液器中的流动相被高压泵打入系统,样品溶液经进样器进入流动相;


    被流动相载入色谱柱(固定相)内,由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数;


    在两相中作相对运动时,经过反复多次的吸附-解吸的分配过程,各组分在移动速度上产生较大的差别;


    被分离成单个组分依次从柱内流出,通过检测器时,样品浓度被转换成电信号传送到记录仪;


    数据以图谱形式打印出来高效液相色谱仪主要有进样系统、输液系统、分离系统、检测系统和数据处理系统;


    下面将分别叙述其各自的组成与特点。


    进样系统


    一般采用隔膜注射进样器或高压进样间完成进样操作,进样量是恒定的。


    这对提高分析样品的重复性是有益的。


    输液系统


    该系统包括高压泵、流动相贮存器和梯度仪三部分。


    高压泵的一般压强为47~44X10Pa,流速可调且稳定,当高压流动相通过层析柱时;


    可降低样品在柱中的扩散效应,可加快其在柱中的移动速度;


    这对提高分辨率、回收样品、保持样品的生物活性等都是有利的。


    流动相贮存器和梯度仪,可使流动相随固定相和样品的性质而改变;


    包括改变洗脱液的极性、离子强度、PH值,或改用竞争性抑制剂或变性剂等。


    这就可使各种物质(即使仅有一个基团的差别或是同分异构体)都能获得有效分离。


    分离系统


    该系统包括色谱柱、连接管和恒温器等。


    色谱柱一般长度为10~50cm(需要两根连用时,可在二者之间加一连接管);


    内径为2~5mm,由"优质不锈钢或厚壁玻璃管或钛合金等材料制成;


    住内装有直径为5~10μm粒度的固定相(由基质和固定液构成)。


    固定相中的基质是由机械强度高的树脂或硅胶构成;


    它们都有惰性(如硅胶表面的硅酸基因基本已除去)、多孔性(孔径可达1000?)和比表面积大的特点;


    加之其表面经过机械涂渍(与气相色谱中固定相的制备一样);


    或者用化学法偶联各种基因(如磷酸基、季胺基、羟甲基、苯基、氨基或各种长度碳链的烷基等)或配体的有机化合物。


    因此,这类固定相对结构不同的物质有良好的选择性。


    例如,在多孔性硅胶表面偶联豌豆凝集素(PSA)后,就可以把成纤维细胞中的一种糖蛋白分离出来。


    另外,固定相基质粒小,柱床极易达到均匀、致密状态,极易降低涡流扩散效应。


    基质粒度小,微孔浅,样品在微孔区内传质短。这些对缩小谱带宽度、提高分辨率是有益的。


    根据柱效理论分析,基质粒度小,塔板理论数N就越大。


    这也进一步证明基质粒度小,会提高分辨率的道理。


    再者,高效液相色谱的恒温器可使温度从室温调到60C;


    通过改善传质速度,缩短分析时间,就可增加层析柱的效率。

标签: 液相色谱仪

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