高效液相色谱仪操作技巧

　　任何颗粒物进进高效液相色谱仪后都会在柱子进口端被筛板挡住，的结果是将柱子堵塞，表现出的特征是系统压力增加并使色谱峰变形。因此，要采取各种预防措施，包括操纵步骤和商品仪器自身的各种过滤设计，努力防止或减少颗粒物进进高效液相色谱仪中，从而延长仪器和色谱柱的使用寿命，并进步数据的可靠性。

　　在高效液相色谱仪中，颗粒物的主要来源有三个途径：活动相、被测样品和仪器系统部件的磨损物。

　　1、被测样品

　　使用针筒式过滤器不可能100%得到通过过滤器的被测样品，总会或多或少的丢失。丢失来自这样几方面：过滤器滤膜的吸附、过滤器滤出的颗粒物上的吸附、针筒式滤膜过滤器与针筒连接处的渗漏等。

　　2、活动相

　　无论是高效液相色谱仪HPLC级的水还是在实验室使用超纯水净化系统制备的水，一步也是通过0.2μm微孔滤膜。任何一种缓冲液中加进了固体物，必然活动相过滤将。少量杂质颗粒存在于活动相中必然成为残渣。

　　解决办法：

　　2.1.活动相制备仅采用HPLC级液体时不需要过滤，反之所有活动相组成在使用前必须过滤。

　　2.2.在连接储液瓶和泵的输液管的末端进口采用下沉式过滤器（常见材质有熔融玻璃砂芯滤板和微孔金属的两种）也是很重要的。这个过滤器的规格为≥10μm的微孔物质，所以它不能取代活动相过滤步骤，但是它能除往系统中的尘土并保证储液瓶、输液管使用的可靠性。

　　2.3.推荐在HPLC系统中采用一个0.45或0.5μm的在线多孔过滤器，接在自动进样器和柱子之间，即使已使用了保护柱。这个在线过滤器将成为挡板代替柱头的滤板，而且如采用一个玻璃砂芯滤板，既便宜，更换又方便（几分钟就可更换）。若采用在线过滤，高效液相色谱仪检测每批样品开始前记录下压力值，当压力上升一定值，例如25%或增加500psi，应该更换玻璃砂芯滤板了，更换以后冲洗几分钟系统将恢复到原来的压力值。

　　3、仪器系统部件的磨损物

　　，在高效液相色谱仪HPLC系统中颗粒物的另一个主要来源是输液泵密封垫和进样阀旋转轴的磨损。关于输液泵密封垫的磨损更换有两种不同建议。

　　3.1.在一般实验室中输液泵密封垫通常使用寿命为六个月到一年，因此建议半年或一年更换这些密封垫。

　　3.2.原装密封垫的密封效果，更换以后轻易引起活动相渗漏。所以，只要不漏液就不要轻易更换密封垫。