紫外分光光度计的校正方法

    紫外分光光度计，就是根据物质的吸收光谱研究物质的成分、结构和物质间相互作用的有效手段。紫外分光光度计可以在紫外可见光区任意选择不同波长的光。物质的吸收光谱就是物质中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波长的光能量，相应地发生了分子振动能级跃迁和电子能级跃迁的结果。由于各种物质具有各自不同的分子 、原子和不同的分子空间结构，其吸收光能量的情况也就不会相同，因此，每种物质就有其特有的、固定的吸收光谱曲线，可根据吸收光谱上的某些特征波长处的吸光度的高低判别或测定该物质的含量。
    紫外分光光度计的校正方法：分光光度法的重要的一个物理化学量是吸光度。为了获得准确的研究结果，准确测得样品溶液的吸光度是非常重要的。一般，分析结果的不可靠性与偶然误差和系统误差有关。偶然误差影响测量的精密度，可通过足够数量测量的统计处理来减少;系统误差影响测量结果的准确度，可在大体相同实验条件下，用比较一种物质的准确测量结果，使系统误差统一起来。而分光光度计的系统误差(波长校正、分光光度计的慢散光、放大器的线性响应、暗电流和比色皿的光程)和操作误差(温度改变、仪器读数、操作者的改变、使用物质的纯度、称量和浓度、pH)对测量吸光度的影响是可以检查和校正的。关于操作误差，多数情况下，通过严格按操作程序测量、仪器调零、准确称量等来控制或减少这种误差的产生。关于仪器的系统误差，可通过对分光光度计的定期校正来克服，若所需准确度很高的测量，则必须天天校正。
    校正内容：
    1、波长的准确度试验以仪器显示的波长数值与单色光的实际波长值之间误差表示，应在±1.0nm范围内。可用仪器中氘灯的486.02nm与656.10nm谱线进行校正；
    2、吸收度的准确度试验；
    3、杂散光的试验；
    4、波长重现性试验；
    5、分辨率试验。
    吸光度的校正方法：校正吸光度常用一很纯物质一定浓度的溶液为标准，且此溶液的吸光度系数经不同实验室核对，为了使标准液吸光度不受测定波长的微移动而有改变，常选择具有较平滑吸收高峰的物质，同时要求溶液稳定，且在相当的波长范围内吸收度的改变符合Beer-Lambert定律，常用硫酸铜、硫酸铵钴和硝酸钠或钾的溶液。铬酸钾溶液是常用的标准溶液，此溶液在紫外区和可见区均适用。
    波长或波数的校正方法：可用具有窄吸收带的溶液，滤光片或蒸气来校正所需要的光波范围。如果要求很高的精密度时，可用放电灯泡发射的射线来校正。有的光谱仪其上已装有一个为校正用的灯。苯的蒸气对校正一定范围的波长亦很有用，可用一小滴苯放于一厘米厚的吸收杯中，测其吸收波长，在远紫外区可用氧气的吸收带进行校正。用各种稀土金属的滤光片，可以很快地校正波长，但准确度不如上述方法高。常用含有钬和钕、镨离子的滤光片。
    杂散光的校正方法：小量的杂散光往往会引起较大的测量误差，它的校正可用一个能完全吸收某一波长单色光，且在其他波长吸收很弱的溶液。从这个溶液所表现的透光情况可推测杂散光的近似值。由杂散光带来的伪吸收带，亦可用Beer-Lambert定律来检查，但用此定律检查伪吸收带误差较大。由切断范围之外所表现的透射比可得出近似的杂散光百分数。若所含杂散光大于0.1%，应设法减低，或对测得的吸收光度进行校正。由杂散光引起的误差与杂散辐射成正比，因此校正值很容易从化合物的近于正确的曲线计算而得。此外，还可用一个适当的滤光片，该滤光片在测定波长范围内完全透光，但吸收此范围外的光波，由此来消除杂散光。