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类别:技术参数 出处:维库仪器仪表网 发布于:2018-03-15 15:49:21 | 824 次阅读
高效毛细管电泳色谱仪(CE)是以毛细管为分离通道,以高压直流电场为驱动力,利用荷电粒子之间的淌度差异和分配系数差异进行分离。由于CE溶质区带的超小体积特性导致光程太短,圆柱形毛细管作为光学表面不够理想,对检测器灵敏度要求相当高。CE常用检测器有紫外检测器、激光诱导荧光检测器、质谱检测器和电化学检测器等。
一、紫外检测器:
紫外检测器是基于物质对紫外吸收进行检测,是成熟的检测器,在CE中应用广。
1、原理:
入射紫外光通过样品时,被吸收的多少符合朗伯-比耳定律。
检测点在毛细管的末端,检测点的毛细管的外涂层要烧掉。
2、检测方法:
(1)固定波长:
光源为低紫外氘灯,用滤光片获得固定波长的光。
(2)可变波长:
光源为氘灯或钨灯,用单色器(棱镜或光栅)获得连续可调波长的光。
(3)快速扫描:
1)利用线性二极管阵列快速捕获紫外光。
2)利用硅光电倍增管作快速扫描。
3、特点:
(1)通用性好,特别是对蛋白质的适用性很强。
(2)灵敏度不足。
4、提高灵敏度的方法:
由于CE检测池的光路长度为毛细管内径,一般不超过100μm,小内径的毛细管限制了紫外检测器的灵敏度,可采用以下几种方法来提高灵敏度。
(1)优化测定波长:
通过测定不同波长下的信噪比来选择测定波长,以提高灵敏度。
(2)减少检测噪音:
1)提高光源强度。
2)采用聚焦和狭缝等减少背景光的影响。
3)采用良好的信号放大系统。
(3)扩展吸光光路长度:
1)为了克服圆柱形毛细管表面引起的散射、失真等不利的光学特性和增加光路长度,可采用矩形、扁形、Z形和泡型等特殊毛细管。当然柱效会有所下降。
2)对于普通毛细管,可采用轴向照射和多次反射来增加光路长度。
①轴向照射:将激光光束从毛细管末端沿管轴方向入射,在毛细管侧面进行检测。
②多次反射:在毛细管壁镀上银,分别开入射窗和出射窗。当入射光以特定角度入射后,在毛细管内反射30~40次后从出射窗口射出。
二、激光诱导荧光检测器:
激光诱导荧光检测器采用激发光源使检测物质产生荧光进行检测。
检测下限为10ˉ12~10ˉ10mol/L。
三、质谱检测器:
在CE-MS联用中,毛细管区带电泳为常用。电子喷雾离子源可检测多种高质量的带电分子,从CE分离出来的分子经过接口后直接进入MS,是MS的离子源。
检测下限为10ˉ9~10ˉ7mol/L,通用性好,可获得溶质的结构信息,但接口复杂。
四、电化学检测器:
电化学检测器可避免光学类检测器遇到的光程太短的问题,是CE中灵敏的检测器之一。
1、电导检测器:
柱上电导检测是在毛细管壁上用激光钻两个孔,插上两根铂电极,再将孔封住进行检测。
检测下限为10ˉ7~10ˉ5mol/L,通用性好,但需专门装置和毛细管处理。
2、安培检测器:
CE中微量样品可使库仑效率大大提高,可达40%以上,而在HPLC中很少超过10%。
检测下限为10ˉ9~10ˉ8mol/L,灵敏度高,选择性好,但仅适用于电活性物质的检测。
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