造成高效液相色谱仪流体阻力加大的原因

　　色谱柱是高效液相色谱的心脏，在高效液相色谱仪的使用中，保持色谱柱的柱效、容量和渗透性，延长柱子的使用寿命非常重要。色谱柱压升高一般是由于柱床内产生了杂质，造成流体阻力加大所致。这两个原因，大致又可以分为以下几方面：

　　1、流动相的前处理

　　杂质堵塞色谱柱进口滤片，导致压力升高。这是由于流动相可能没有过滤，或过

　　滤不彻底，使固体杂质滞留于滤板上所致。

　　2、样品的沉淀

　　当溶解样品的溶剂与流动相不一致时，样品进入色谱柱时，可能因溶解度降低而沉淀出来，

　　造成压力升高。

　　3、晶体的析出

　　使用含有缓冲液的流动相时，缓冲液中的无机盐可能会残留在体系之中，它们会因在新流动

　　相中的溶解度降低而析出，造成流体阻力加大、压力升高。

　　4、细菌或霉菌孳生

　　霉菌在流动相中、管路中或柱子进口处繁殖、生长堵塞滤板，导致压力升高。所以在使用磷

　　酸盐缓冲液时一般要现配现用。

　　5、溶质吸附

　　当溶质在柱子上有较强的吸附，且所用的流动相难以将它们洗脱时，累积的未洗脱溶质也会

　　造成阻力增大和压力升高。

　　6、流动相更换过度较快

　　当改变流动相体系时，不彻底的更换使不同性质、互不混溶的流动相存在于同一个体系之中，也会造成压力升高。

　　7、压力脉冲

　　运行过程中，有时会产生系统内压力的突然升降。如此所形成的压力脉冲会造成多孔填料的

　　崩坏和柱床结构的微小变化，填料微屑的长期积累也可能会使柱床阻力增大，造成压力升高。

　　处理对于缓冲液盐分如(乙酸铵等)沉积于柱内的情况先用40～50℃的纯水,低速正向冲洗柱子,待柱压逐渐下降后,相应提高流速冲洗,柱压大幅度下降后,用常温纯水冲洗,之后用纯甲醇冲洗柱子30分钟;

　　对于样品污染沉积的情况,由样品的沉积引起污染的C18柱,和纯水反向冲洗柱子,然后换成甲醇冲洗,接着用甲醇+异丙醇(4+6)冲洗柱子(冲洗时间的长短由样品污染的情况而定),再用换成甲醇冲洗,然后用纯水冲洗,甲醇冲洗正向冲洗柱子30分钟以上。